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脊髓损伤动物模型

时间:2021-09-29浏览次数:765

脊髓损伤开放型急性脊髓损伤模型大鼠
闭合型急性脊髓损伤模型大/小鼠
慢性缺血性脊髓损伤大鼠/兔


急性脊髓损伤(ASCI)小鼠模型的建模方法 

模式动物品系:SPF级ICR小鼠,健康,雄性,8~12W

实验分组:实验分六组:正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组。

实验周期:4-6 weeks

建模方法:

取 ICR 小鼠,戊Ba比妥钠麻醉后,采用椎板切除术暴露 T9-T10 处脊髓。然后采用脊髓打击器,于暴露脊髓处施加 90 kilodynes 的力造成挫伤型脊髓损伤,SCI 后连续 10 天每天肌肉注射庆大霉素(8mg/kg)防止术后感染,并每天两次人工膀胱按压挤尿直至恢复自主膀胱活动为止(防止尿潴留)。

处理一周后进行 BBB 评分评估小鼠后肢运动能力;

BBB score=0 时,则模型构建成功。将构模成功的小鼠分为两组,每组 8只,于挫伤型 SCI 处理 1week 后,于大鼠尾静脉处进行注射处理(模型组只注射生理盐水,治疗组注射含有受试药物的生理盐水 )。

SCI 后,16 只小鼠饲养 3week 时,根据SCI后 3 week 结果每组取 3 只效果最显著的小鼠取脊髓进行病理学检测,剩余 10 只小鼠继续饲养并与5week,7week,9week进行BBB 评分和机械触诱发痛检测。SCI后 9week 时所有受损脊髓中心进行冻存或 OCT 包埋。






模型评价

1. BBB test

于药物注射后每隔一周进行 BBB test,直至移植后 8 周(即 SCI 后 3week、5week、7week、9week)。药物注射后 2 周(即 SCI 后 3week)共 16 只小鼠进行行为学检测数据,选择变化显著的 3 只小鼠(每组 3 只,即 6 只小鼠)的脊髓组织进行病理学检测。剩余 5 只小鼠(每组 5 只,即 10 只小鼠)依旧隔一周(即 SCI 后 5week、7week、9week)进行 BBB test。分值范围为0-21分,其中0分代表后肢完全失去运动功能,21分代表后肢运动功能基本正常。


2. Mechanical allodynia test (机械触诱发痛检测)

使用 Von Frey 测痛套件,记录缩足的压力(g),2 分钟时间间隔内测量 4 次,剔除最大值和最小值后获取的中间值作为痛阈(g)。


脊髓损伤模型的建立及术后小鼠情况:

所有实验小鼠在打击时均出现痉挛性摆尾,双下肢及躯体回缩扑动,随后双下肢瘫痪,损伤节段脊髓硬膜完整、出血、水肿。所有麻醉后小鼠于术后苏醒,出现双下肢瘫痪,运动、感觉功能丧失,依靠双上肢移动躯体,头颈部活动正常。术后1d,所有小鼠BBB评分均小于1分,活动明显减少,进食、饮水量减少,协助排尿7d后大部分小鼠恢复自主排尿功能。

机械触诱发痛检测:将小鼠置于金属网格的架子上使之适应环境,采用Von Frey丝自足底下方垂直剌激后爪底皮肤表面,能引起阳性缩爪反应所需的最低力度记为缩爪阈值,造模后小鼠的PWTs值较正常小鼠均下降。


组织病理学

3.免疫荧光

药物注射后两周,取受损脊髓组织,石蜡切片后,检测其中 MAP-1 的表达分布。


4.小胶质细胞/ 巨噬细胞检测— 激光共聚焦

药物注射后两周,取受损脊髓组织,石蜡切片后,检测其中 ED1(小胶质细胞/巨噬细胞活化 marker)。


需确认的信息
1. 模型种属(大鼠还是小鼠或是其他种属)
2. 动物体重有无要求,年龄有无要求
3. 雌雄有无要求
4. 模型构建具体方案
5. 取材要求(采血、取组织样本)

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可以买球赛的软件·(中国)公司官方网站实验服务项目

动物实验细胞生物学病理实验
消化系统模型细胞培养病理染色
胃酸分泌模型普通细胞株HE染色
脓毒症模型细胞缺氧培养油红O染色
胃溃疡模型细胞培养+支架番红固绿染色
胰腺炎模型干细胞培养Masson染色
肝纤维化模型原代细胞分离/提取/培养天狼猩红染色
DIO肥胖模型细胞转染/病毒感染PAS糖原染色
胆结石模型Trans well共培养阿利新蓝染色
结肠炎(UC)模型细胞增殖甲苯胺蓝染色
脂肪肝模型细胞计数尼氏染色
急性肝损伤模型生长曲线测定LFB髓鞘染色
免疫、代谢系统疾病模型存活曲线测定普鲁士蓝染色
骨质疏松模型ccK-8增殖检测VG染色
糖尿病模型MTT增殖检测EVG染色
高尿酸血症模型CFSE检测增殖-流式检测VonKossa染色
呼吸系统模型BrDU检测-免疫荧光法刚果红染色
肺纤维化模型细胞凋亡苏丹黑B染色
慢性肺阻塞模型Annexin V/PI流式检测细胞凋亡Trap染色
急性肺损伤模型WB检测凋亡相关蛋白抗酸染色
哮喘模型透射电镜观察凋亡小体革兰氏染色
肺栓塞模型Tunel染色(POD法,DAB显色)AB-PAS染色
支气管炎模型Tunel(荧光法,含试剂盒)亚甲基蓝染色
泌尿生殖系统模型DNA ladder法苯胺蓝染色
慢性肾衰模型细胞周期荧光 DAPI染色
急性肾衰模型细胞显微计数普鲁士蓝染色
肾间质纤维化模型PI染色间苯二酚碱性品红染色
肾结石模型BrdU渗入法银染
肾炎模型免疫荧光染色黑色素染色
子宫内膜异位症模型PI流式检测细胞周期镀银染色
心血管系统模型细胞运动PASM 六胺银染色
冠心病模型Transwell检测细胞迁移VG染色
心肌梗死模型Transwell检测细胞侵袭富尔根染色
心脏骤停模型细胞划痕亚甲基蓝染色
慢性心力衰竭模型细胞克隆碘-碘化钾染色
动脉粥样硬化模型集落形成法/稀释铺板方法Goldner三色法染色
白血病模型软琼脂克隆法PAS-萘酚磺S染色
高血压模型毛细管克隆法改良苯酚品红染色
神经系统模型体外实验血管生成网状纤维染色
脑卒中模型磁珠分选细胞β-半乳糖苷酶染色
栓塞性脑梗死模型流式分选细胞镀银染色
脑出血模型开机费movat五色染色
脑损伤模型单色维多利亚蓝染色
脊髓损伤模型双色免疫组化
帕金森模型CBA多细胞因子流式检测免疫组化预式
老年痴呆模型组织/血液细胞制备免疫组化正式
应激模型组织单细胞制备免疫荧光(石蜡-单标)
骨骼疾病模型中性粒细胞提取免疫荧光(石蜡-双标)
骨折模型其他样本细胞制备(如血液等)免疫荧光(石蜡-三标)
骨缺损模型外周血PBMC分离免疫荧光(冰冻-单标)
风湿免疫性关节炎模型线粒体组学免疫荧光(冰冻-双标)
骨关节炎模型线粒体膜电位检测-流式法制片前处理
五官疾病模型线粒体膜电位检测-免疫荧光法石蜡组织包埋
眼科疾病模型线粒体ROS生物含量检测--流式特殊包埋(细胞、材料、眼球等)
鼻腔疾病模型线粒体ROS生物含量检测--免疫荧光软化(肝硬化、皮肤结痂、植物等)
皮肤疾病模型线粒体通透性转换孔(mPTP)骨组织脱钙(小)
皮肤损伤模型溶酶体免疫荧光法骨组织脱钙(大)
肿瘤疾病模型线粒体+溶酶体共定位骨组织EDTA脱钙(小)
原位瘤模型内质网骨组织EDTA脱钙(大)
转移瘤模型线粒体钙瞬时变化检测-流式石蜡白片
皮下植瘤模型ATP检测细胞爬片

ADP检测

AMP检测



流式DNA/RNA半定量检测基因编辑工具
组织细胞悬液处理pcr检测mRNA合成(3保1)片段/质粒/引物合成
细胞处理microRNA检测质粒载体构建
血液标本处理LncRNA表达量的检测过表达腺病毒载体构建包装
细胞刺激培养CirRNA表达量的检测shRNA腺病毒载体构建包装
单色检测凝胶电泳过表达慢病毒载体构建包装
双色检测基因合成shRNA慢病毒载体构建包装
Annexin V/PI凋亡<300过表达腺相关病毒载体构建包装
细胞周期300-1,500shRNA腺病毒载体构建包装

1500 - 5000稳转细胞株

>5000

特殊序列



ELISAWBqPCR
组织匀浆处理蛋白提取及定量一RNA抽提
ELISA(不含试剂盒)48T/kitWB检测一(10孔膜/指标)mRNA引物设计及合成
ELISA(不含试剂盒)96T/kit灰度值分析及作图一(10孔膜/指标)miRNA引物设计及合成
ELISA(含国产试剂盒)48T/kit蛋白提取及定量二LncRNA引物设计及合成
ELISA(含国产试剂盒)96T/kitWB检测二(10孔膜/指标)CircRNA引物设计及合成

灰度值分析及作图二(10孔膜/指标)mRNA RT-qPCR


miRNA RT-qPCR


LncRNA RT-qPCR


CircRNA RT-qPCR



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