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应激模型

时间:2021-09-29浏览次数:760

条件恐惧实验系统(FCS)用于小型啮齿类动物(大、小鼠)环境相关条件性恐惧实验研究。啮齿类动物在恐惧时会表现出特有的不动状态(immobility),动物在这种情况下倾向于保持静止不动的防御姿势。抗抑郁药和抗中枢兴奋药可以明显缩短不动状态持续的时间。实验过程中,实验对象被给与一个声音信号(条件刺激),随后给予电击(非条件)刺激。该训练称为条件性训练,训练结束后实验动物进行声音信号或环境联系性实验。一般情况下啮齿类动物对相应的环境和不同环境下同样的声音信号都会做出明显的条件性恐惧反应,如静止不动。这种测试可以在训练结束后立刻或几天后进行可以提供在条件信号影响下短期和长期记忆的信息。


实验方式(1

包括三个阶段

第一阶段:条件性训练(第1天)

无刺激     180s

声音信号   30s

电击       2s

无刺激     20s
第一阶段为训练实验,实验动物被给予条件性声音刺激。

第二阶段:环境相关(2天)

无刺激     180s

第二阶段将实验动物放入第一阶段中的环境中以期评价环境相关的条件性恐惧程度。

第三阶段:改变的环境相关信息(2天+2h)

无刺激    180s

声音      180s

无刺激    60s

改变环境信息(比如在实验箱中放入一个分隔板、改变光源和背景噪音或用其他溶液清洗实验箱等)后观察动物的条件性恐惧程度。刺激的顺序由实验者决定。


实验结束后通过软件分析系统对记录的数据进行分析。

 以上的实验中,第二阶段没有给与任何刺激但是实验动物表现出明显的环境相关性恐惧,表现为活动性明显减少,但是并没有出现freezing反应。在第三阶段,同一只动物在改变了环境后没有表现出任何不动反应(活动性减少),但是在给与声音信号后,可以观察到明显地条件性恐惧freezing反应。

实验方式(2

模型的制备:将大鼠放在动物饲养室内适应一周。饲养室内温度为24±0.5℃,湿度为60%,光:暗周期为12h:12h(光照时间为8:00-20:00),随机分笼单独饲养,自由进食、饮水。

A.条件性恐惧的建立:将大鼠分别放入斯金纳箱(箱子底部为铜条栅栏,可通电)内,适应2分钟后再给予单一频率声音信号(4.5KHZ,60dB,30S,该声音由美国Adobe公司的Adobe Audition2.0软件制作)适应4次(两次声音间隔1-4分钟),然后再给予6次以声音信号为提示的不可逃避足底电击(1mA,5s),声音与电击同时结束,两次声音间隔为1-4分钟,共28分钟。动物在被电击时发生惊叫、惊跳、逃避等,听到声音提示时出现慌张、逃避或者僵立行为(除呼吸外无其他运动行为),这样建成恐惧动物模型(以下简称建模)。实验结束后让动物在斯金纳箱内继续停留2分钟后放回饲养笼饲养。每次实验结束后用90%酒精擦拭箱底,用湿布擦拭箱壁,以避免残留气味对后续实验大鼠的影响。

B.恐惧消退训练:24h后将已经建立条件性恐惧的动物再次放入斯金纳箱内,仅给予声音信号16次,两次声音间隔为1-2分钟,共24分钟。恐惧对照组在对应的时间点放进斯金纳箱内24分钟,不进行消退训练(不给声音刺激)。

C.条件性恐惧消退保持测试:恐惧对照组和恐惧消退组(注:此时大鼠分为两组:恐惧消退组和对照组)分别在恐惧消退训练后的第1、3、7天将大鼠放在训练箱内,给予5次声音信号,时间间隔为0.5s,记录3分钟内的不僵立时间,计算3分钟内不僵立时间百分比,作为消退保持成绩。百分比越高,表明消退保持成绩越好。


可记录的数据和参数

1)Freezing相关:实验时间、freezing总次数、每次freezing时间点、每次freezing持续时间、freezing总时间、freezing时间占总时间的百分比。

2)活动度相关:总实验时间、总距离(cm)、总平均速度(cm/s)、每个阶段的时间、距离及平均速度。


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可以买球赛的软件·(中国)公司官方网站实验服务项目

动物实验细胞生物学病理实验
消化系统模型细胞培养病理染色
胃酸分泌模型普通细胞株HE染色
脓毒症模型细胞缺氧培养油红O染色
胃溃疡模型细胞培养+支架番红固绿染色
胰腺炎模型干细胞培养Masson染色
肝纤维化模型原代细胞分离/提取/培养天狼猩红染色
DIO肥胖模型细胞转染/病毒感染PAS糖原染色
胆结石模型Trans well共培养阿利新蓝染色
结肠炎(UC)模型细胞增殖甲苯胺蓝染色
脂肪肝模型细胞计数尼氏染色
急性肝损伤模型生长曲线测定LFB髓鞘染色
免疫、代谢系统疾病模型存活曲线测定普鲁士蓝染色
骨质疏松模型ccK-8增殖检测VG染色
糖尿病模型MTT增殖检测EVG染色
高尿酸血症模型CFSE检测增殖-流式检测VonKossa染色
呼吸系统模型BrDU检测-免疫荧光法刚果红染色
肺纤维化模型细胞凋亡苏丹黑B染色
慢性肺阻塞模型Annexin V/PI流式检测细胞凋亡Trap染色
急性肺损伤模型WB检测凋亡相关蛋白抗酸染色
哮喘模型透射电镜观察凋亡小体革兰氏染色
肺栓塞模型Tunel染色(POD法,DAB显色)AB-PAS染色
支气管炎模型Tunel(荧光法,含试剂盒)亚甲基蓝染色
泌尿生殖系统模型DNA ladder法苯胺蓝染色
慢性肾衰模型细胞周期荧光 DAPI染色
急性肾衰模型细胞显微计数普鲁士蓝染色
肾间质纤维化模型PI染色间苯二酚碱性品红染色
肾结石模型BrdU渗入法银染
肾炎模型免疫荧光染色黑色素染色
子宫内膜异位症模型PI流式检测细胞周期镀银染色
心血管系统模型细胞运动PASM 六胺银染色
冠心病模型Transwell检测细胞迁移VG染色
心肌梗死模型Transwell检测细胞侵袭富尔根染色
心脏骤停模型细胞划痕亚甲基蓝染色
慢性心力衰竭模型细胞克隆碘-碘化钾染色
动脉粥样硬化模型集落形成法/稀释铺板方法Goldner三色法染色
白血病模型软琼脂克隆法PAS-萘酚磺S染色
高血压模型毛细管克隆法改良苯酚品红染色
神经系统模型体外实验血管生成网状纤维染色
脑卒中模型磁珠分选细胞β-半乳糖苷酶染色
栓塞性脑梗死模型流式分选细胞镀银染色
脑出血模型开机费movat五色染色
脑损伤模型单色维多利亚蓝染色
脊髓损伤模型双色免疫组化
帕金森模型CBA多细胞因子流式检测免疫组化预式
老年痴呆模型组织/血液细胞制备免疫组化正式
应激模型组织单细胞制备免疫荧光(石蜡-单标)
骨骼疾病模型中性粒细胞提取免疫荧光(石蜡-双标)
骨折模型其他样本细胞制备(如血液等)免疫荧光(石蜡-三标)
骨缺损模型外周血PBMC分离免疫荧光(冰冻-单标)
风湿免疫性关节炎模型线粒体组学免疫荧光(冰冻-双标)
骨关节炎模型线粒体膜电位检测-流式法制片前处理
五官疾病模型线粒体膜电位检测-免疫荧光法石蜡组织包埋
眼科疾病模型线粒体ROS生物含量检测--流式特殊包埋(细胞、材料、眼球等)
鼻腔疾病模型线粒体ROS生物含量检测--免疫荧光软化(肝硬化、皮肤结痂、植物等)
皮肤疾病模型线粒体通透性转换孔(mPTP)骨组织脱钙(小)
皮肤损伤模型溶酶体免疫荧光法骨组织脱钙(大)
肿瘤疾病模型线粒体+溶酶体共定位骨组织EDTA脱钙(小)
原位瘤模型内质网骨组织EDTA脱钙(大)
转移瘤模型线粒体钙瞬时变化检测-流式石蜡白片
皮下植瘤模型ATP检测细胞爬片

ADP检测

AMP检测



流式DNA/RNA半定量检测基因编辑工具
组织细胞悬液处理pcr检测mRNA合成(3保1)片段/质粒/引物合成
细胞处理microRNA检测质粒载体构建
血液标本处理LncRNA表达量的检测过表达腺病毒载体构建包装
细胞刺激培养CirRNA表达量的检测shRNA腺病毒载体构建包装
单色检测凝胶电泳过表达慢病毒载体构建包装
双色检测基因合成shRNA慢病毒载体构建包装
Annexin V/PI凋亡<300过表达腺相关病毒载体构建包装
细胞周期300-1,500shRNA腺病毒载体构建包装

1500 - 5000稳转细胞株

>5000

特殊序列



ELISAWBqPCR
组织匀浆处理蛋白提取及定量一RNA抽提
ELISA(不含试剂盒)48T/kitWB检测一(10孔膜/指标)mRNA引物设计及合成
ELISA(不含试剂盒)96T/kit灰度值分析及作图一(10孔膜/指标)miRNA引物设计及合成
ELISA(含国产试剂盒)48T/kit蛋白提取及定量二LncRNA引物设计及合成
ELISA(含国产试剂盒)96T/kitWB检测二(10孔膜/指标)CircRNA引物设计及合成

灰度值分析及作图二(10孔膜/指标)mRNA RT-qPCR


miRNA RT-qPCR


LncRNA RT-qPCR


CircRNA RT-qPCR



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